¿De donde sacamos ADN? ¿Como se obtiene?
El ADN al estar en todos los núcleos de las células, excepto los glóbulos rojos, se puede obtener de todos los tejidos, piel, uñas, pelo, sangre, saliva, semen, etc.
Hay varios métodos para extraer ADN de esos tejidos, algunos muy complejo y otros mas simples, pero en los laboratorios de diagnóstico se usan Kits de extracción con los pasos y soluciones necesarias para realizarlo. Mínimamente se necesitará un centrifuga tubos y pipetas y las soluciones que vienen preparadas en el Kit
Así se ve el ADN ese pequeño pellet o botón en el fondo del tubo casi transparente que al disolverse en el buffer ya es imposible verlo.
¿Entonces como los vemos?
Recién podremos verlo al hacer geles de agarosa y teñirlo con un colorante como el bromuro de etidio que es fluorescente bajo luz UV.
ADN en un microtubo se ve como una maraña en medio del agua y a la derecha de la imagen se observa un gel de agarosa con bromuro de etidio en foto blanco y negro.
El ADN migrará y se separa en fragmentos porque tiene carga negativa migrando al polo positivo en un electroforesis
Se recomienda ver el siguiente video
Duplicación del ADN Imagen original de Brooks Cole 2001 modificada por Gabriela Iglesias
El ADN debe duplicarse en cada ciclo celular para que cada célula hija mantenga la misma cantidad y cualidad de información. Esta replicación se produce durante la fase S del ciclo celular, es decir que cada célula antes de dividirse a través del proceso conocido como mitosis, debe duplicarse para que cada célula hija tenga exactamente la misma cantidad de ADN que la célula madre y ademas debe tener el ADN intacto es decir no haber sufrido mutaciones para que ambas células hijas sean iguales.
El ADN para poder duplicarse, cada una de las hebras de la doble hélices sirve de molde para la síntesis de una nueva. Al final de este proceso cada una de las dos nuevas cadenas de ADN tiene una cadena o hebra de nueva y la que le sirvió de molde (vieja).
El Proceso de replicación es complejo y en el intervienen una serie de enzimas. Existen sitios específicos donde comienza la replicación denominados orígenes de replicación. Cuando comienza se forma una burbuja de replicación que contiene dos horquillas.
Un breve resumen de las enzimas que participan y como lo hacen se representa en una animación donde se pueden ver las enzimas ADN polimerasa encargada de la adición de nucleótidos por complementariedad, la helicasa que abre la horquilla, la ARN polimerasa que es quien comienza la replicación ya que puede unir dos nucleótidos libres y forma un pequeño fragmento de ARN, que luego es removido por una exonucleasa y la ADN polimerasa lo reemplaza por ADN, sellando el eje azúcar fosfato mediante la ligasa.
En el caso de los eucariotas como el ADN es tan extenso, estirado llega a medir 2m, es necesario que se formen muchas horquillas de replicación en varias partes al mismo tiempo, eso se denominan burbujas de replicación. Cada burbuja tiene dos horquillas de replicación en dirección opuesta
Burbuja de replicación. Fuente Chemis 2000
Para más detalles sobre las ADN polimerasas tanto en bacterias como en eucariotas ver aquí
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