TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR ¿CUALES SON?

¿Como visualizamos el ADN?

Para poder visualizar el ADN debemos recurrir a los geles de Agarosa. Una vez extraído el ADN o hecha una reacción de PCR debemos verificar que el ADN está allí.

PCR o reacción en cadena de la polimerasa

Para eso debemos preparar un gel de agarosa, con una serie de pocillos donde colocar las muestras para que queden sumergidas en el gel y este en un buffer o solución tampón conductor.

Como el ADN tiene carga negativa migrará hacia el polo positivo si le hacemos pasar una corriente eléctrica. De esta forma el ADN migra al polo positivo (ya que tiene carga negativa).

Los fragmentos muy pequeños migran muy rápido en cambio los más grandes migran más lentamente, permaneciendo cerca del pocillo donde se depositaron. El ADN previamente o el gel deben ser teñidos con bromuro de etidio, que es un colorante naranja que emite ese color solo bajo luz UV.

Como se intercala entre los nucleótidos del ADN, el fragmento de ADN se verá naranja.

Gel de control de amplificación por PCR teñido con bromuro de etidio y visto en un transiluminador de luz ultravioleta (UV de 302nm). La PCR se realizó de un segmento de un gen (exón) en tres individuos. 1er, 3ro y 4to pocillo contienen ADN de distintos animales que se amplificó. En el 2do pocillo (de izq. a derecha, no hubo amplificación), o sea falla de la técnica. En el último pocillo (derecha) se ve un marcador de peso molecular, para indicar el tamaño de la banda de ADN (en este caso 130 pares de bases)

En el siguiente video se muestra como se realiza un gel de agarosa

La genética molecular aparece desde el descubrimiento de la doble hélice de ADN de Watson y Crick en 1954. Luego Francis Crick continúa con el descubrimiento del código genético en los 60’s. Es decir se descubrió que las bases del ADN se leen de a 3, y tres combinaciones de letras significan un aminoácido que formará parte de una proteína.

Allí comienza a comprenderse como es la molécula de ADN y como lleva la información que contiene a la célula que la contiene. A esto se lo denominó “Dogma central de la biología molecular”.