TÉCNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR ¿CUALES SON?

Técnica de PCR: Reacción en cadena de la polimerasa

Luego aparece el descubrimiento de las enzimas de restricción que permiten cortar el ADN y así analizarlo. Nace allí la ingeniería genética. Eso permitió cortar y pegar a la molécula de ADN para estudiarla, analizar patologías en ciertos genes, etc.

Hacia fines de los 80’s, Karl Mullis descubre la técnica de PCR que revolucionó a la genética por su practicidad y rapidez para amplificar una región de ADN en cantidad suficiente para luego hacer todo tipo de análisis.

Para saber si la PCR ha resultado, se colocan las muestras en pocillos de geles de agarosa, teñidos con bromuro de etidio (color naranja)

La técnica se describe en los videos que les dejo abajo

 

Para reírse un rato les dejo un video divertido llamado  «La canción de la PCR» de una empresa (BIORAD) que vende los termocicladores o Máquinas para automatizar la técnica para hacer PCR

Secuenciación

La secuenciación o forma de determinar el orden de los nucléotidos en el ADN de cada cromosoma fue descubierta por Sanger

Gracias a este descubrimiento fueron posibles el uso de muchas técnicas para realizar tanto la secuenciación completa del genoma humano como el de muchos animales domésticos y además usar la secuenciación que hoy en día es automática y realizada por un secuenciador en múltiples aplicaciones.

Una de las aplicaciones de los secuenciadores, es el fingerprinting o huellas de ADN, que permite tanto la realización de test de paternidad como identificación de criminales.

En las primeras épocas esta técnica de huellas de ADN descubierta por Sir Alec Jeffries y se realizaba por Southern blot, técnica denominada así en honor a su descubridor llamado de apellido Southern, pero hoy en día se realiza por PCR.

La primera técnica utilizada para la identificación de fragmentos de ADN fue el Southern blot.

Se transfiere al ADN de un gel de agarosa a una membrana de papel de nitrocelulosa, donde se hibridiza con una sonda marcada radioactivamente.

Luego esa membrana se pone con una placa de rayos X y se obtiene una imágen en blanco y negro de las bandas del ADN donde se pegó la sonda por complementariedad de bases.

Luego llegaron el northern (para detectar ARN) y el western para detectar fragmentos de ARN proteínas respectivamente.

 

Método de Secuenciación descrito por Sanger

Esta basado en el freno de la síntesis de ADN cuando se usan dideoxi-nucleótidos en vez de desoxi-ribonucleótidos.

Parte de eso se explica en el video que les dejo abajo